荧光素酶报告基因系统，是以荧光素为底物来检测萤火虫荧光素酶活性的一种报告系统， 测定酶与底物反应过程中释放的生物荧光反映酶生物活性。萤火虫荧光素酶基因作为报告基因，用于指示不同处理条件下基因的表达情况。

萤火虫荧光素酶（Firefly luciferase）大小为 61 KDa，单亚基蛋白，能够催化荧光素

（luciferin）氧化，生成氧化荧光素 oxyluciferin； 

萤火虫萤光素酶催化 luciferin 发光的最强发光波长为 560 nm。

通常将目的基因的 5UTR 或者启动子克隆至 Firefly Luciferase 的上游，或者 3UTR 或预期 RNAi 靶向序列克隆至 Firefly Luciferase 的下游，通过检测萤火虫荧光素酶与底 物的反应活性来检测启动子或者调控元件的转录调控作用。Renilla Luciferase 作为内参 来消除细胞数量或者转染效率等实验组间差异。



1.细胞铺板，转染时细胞密度：一般来说，当细胞密度达到60%～80%时进行转染可以取得较高的 转染效率。但不同细胞的最适转染密度都不尽相同，因此建议在初次转染某种细胞时，可以通过预实验先确认该细胞最佳的转染密度。

2. 转染 根据效率评价，扩大体系进行相对应的转染 例：12 孔板，体系 500 μL


3. 裂解细胞

待转染至相应的时间后，弃培养液，PBS洗一次，将细胞裂解液完全覆盖细胞充分混 匀，按以下方式加入细胞裂解液，充分裂解细胞，约 30 min~1 h



4. 荧光检测

1）取 100 μL 细胞裂解液，加至酶标板中。按照实验需要，可设置 3 孔-5 孔重复；

2）加入 5 μL 萤火虫荧光素酶反应液，震板混匀，检测萤火虫荧光素酶的活力，检测 尽量在 30 min 内完成。

5）分析数据。 注：因酶在不同细胞表达量有所不同，故底物量依不同细胞有所差异，优化区间可参考 5-20 μL。