大鼠幽门螺旋菌（IgG）ELISA试剂盒使用操作原理

    大鼠幽门螺旋菌（IgG）ELISA试剂盒注意事项：

    1、实验严格按照说明书的操作进行，实验结果判定必须以酶标仪读数为准。

    2、酶标包被板开封后如未用完，应立即装入密封袋中加干燥剂保存。

    3、建议所有的标准品、样本和空白对照都做双份检测，取平均值，以减小实验误差。

    4、牢记样本已经稀释5倍，计算结果乘以5才是样本实际浓度。

    5、本试剂盒定量范围为6.25-200ng/L，超过此范围，为标准曲线延伸计算所得，不做为准确定量结果，请用特殊稀释液稀释后测定准确结果（6.25-200ng/L范围内，乘以总稀释倍数即为样本最终浓度。

    6、若显色过浅，可适当延长底物温育时间。

    7、为避免交叉污染，标准品、样本和空白对照每加一个就要更换一次吸头；酶标工作液、样本稀释液和底物等公共组分，要悬臂加样，不得碰到微孔；不得重复使用封板膜。

    8、试剂盒保质期内使用，不同批号的试剂不得混用。

    9、底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。

    大鼠幽门螺旋菌（IgG）ELISA试剂盒操作步骤：

    1、准备：从冰箱取出试剂盒，室温复温平衡30分钟。

    2、配液：用蒸馏水将20倍浓缩洗涤液稀释成原倍的洗涤液。

    3、加标准品和待测样本：取足够数量的酶标包被板，固定于框架上，分别设置标准品孔、待测样本孔和空白对照孔，记录各孔位置，在标准品孔中加入标准品50μL；待测样本孔中先加入待测样本10μL，再加样本稀释液40μL（即样本稀释5倍）；空白对照孔不加。

    4、温育：37℃水浴锅或恒温箱温育30min。

    5、洗板：弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板4次（也可用洗板机按说明书操作洗板）。

    6、加酶标工作液：每孔加入酶标工作液50μL，空白对照孔不加。

    7、温育：37℃水浴锅或恒温箱温育30min。

    8、洗板：弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板4次（也可用洗板机按说明书操作洗板）。

    9、显色：每孔先加入显色剂A液50μL，再加入显色剂B液50μL，平板混匀器混匀30s（或用手轻轻震荡混匀30s），37℃避光显色15min。

    10、终止：取出酶标板，每孔加终止液50μL，终止反应（颜色由蓝色立转黄色）。

    11、测定：以空白孔调零，在终止后15分钟内，用450nm波长测量各孔的吸光值（OD值）。

    12、计算：根据标准品的浓度及对应的OD值，计算出标准曲线的直线回归方程，再根据样本的OD值，在回归方程上计算出对应的样品浓度，也可以使用各种应用软件来计算。最终浓度为实际测定浓度乘以稀释倍数。