一、常规样本——PAXgene Blood RNA Tube 采血

PAXgene Blood RNA Tube 采血

血液由血细胞和血浆组成，其中血细胞包括红细胞，血小板，白细胞；白细胞又包括粒细胞（酸性，中性，碱性粒细胞）和单个核细胞（淋巴细胞，单核细胞）。

全血：是将人体内血液采集到采血管或采血袋内所形成的混合物 。

血液离体后血细胞内的RNA不稳定，采血后极易降解，而体外的基因诱导作用会使得转录组数目增加，体外RNA降解和基因诱导均可导致高估或低估体内转录组数目。

LC-Lab使用BD公司的PAXgene^TM Blood RNA Tube（以下称为PB采血管）采集全血，采集2.5ml血液/管。（PB采血管：内含稳定体内基因转录性状的添加剂，通过减少体外RNA降解，并将基因诱导减少到最小而发挥作用）

采集全血过程：

1、采血前，应将采血管恢复室温（一般PB采血管保存于室温或4℃，最高不超过40℃） 。

2、采血时，多种采血管采集时，最后使用PB采血管；仅用PB采血管时，先用另一个采血管采集1~2mL血样，丢弃该采血管，再使用PB采血管（作用：采血器容积能被预灌注，另减少血压造成的冲击力，一定程度上清洗采血管） 。

3、采血后，立即上下颠倒混匀十次左右，18~25℃正立放置2h。

4、若不立即提取，将采血管正立置于塑料试管架上（注意：试管架与采血管之间需留有空隙，防止低温保存过程中管壁开裂），先于-20℃放置24h，然后转移至-80℃进行长期保存或转移至干冰中进行运输。

5、运输时请使用厚壁泡沫盒，放入充足的干冰，在样品保存及运输过程中应避免反复冻融。

全血的保存方式：

① BD-PAXgeneTM Blood RNA Tube（含有抗凝剂，RNA稳定剂，作用：减少体外降解，将体外基因诱导作用降到最低），通常为静脉采血，采血量：2.5ml，适用对象：人和灵长类动物。

② 普通医用抗凝管（只含有抗凝剂），抗凝剂通常为：EDTA、柠檬酸钠，不允许使用肝素作为抗凝剂，因为肝素是PCR酶的活性抑制剂，会抑制下游实验的PCR反应。

③ 冰冻血液溶解过程中会有破碎的细胞释放RNase，因此勿直接冻存新鲜血液，可在新鲜抗凝血中直接加入trizol裂解混匀，-80℃保存，避免反复冻融（trizol：血液=3:1），采样后一周内必须提取RNA。

注意：实验中发现，PB采血管保存的全血所抽提出来的RNA得率往往会低于普通抗凝管保存的全血所抽提出来的RNA，这是因为PB采血管在未采血前已经有6.9ml的添加剂在里面了，故而采血量最多只能容纳2.5ml，而普通的抗凝管里面只含有抗凝剂，且抗凝剂的量较少，所以同等体积的抗凝管，普通抗凝管的采血量会更高，因此普通抗凝管收集的全血中RNA丰度会更高。

二、常规样本——血清血浆采集

血清血浆采集：

血浆：是抗凝血液经离心分离得到的淡黄色透明液体。

血清：血液凝固析出的淡黄色透明液体。

血清与血浆的区别：血清中不含纤维蛋白等凝血因子。

注意：

①分离血清血浆应严格按照操作说明进行，操作需在1h内完成，避免出现溶血现象，血清血浆分离后避免反复冻融。

②血清血浆送样量的原则：越多越好，如果手头上的血清血浆量较少，则有多少就送多少，通常该种类型的样本RNA含量较低，所以需要通过加大样本量以富集足够多的RNA，以保证后续实验的顺利进行，此外血清血浆RNA通常不质检。

③分离血清/血浆样本的全血不可冷冻，混入的血细胞尽量弃尽。

溶血现象：即因红细胞细胞膜的破裂而导致的红细胞破碎、血红蛋白溢出的现象。溶血可由多种物理或化学因素引起，尤其在人体外，渗透压的变化、机械外力，温度的变化，酸碱度的变化或血液处理的过程中人为添加的一些化学物质，均有可能引起不同程度的溶血。

应对策略：

（1）血液离开人体后，血液环境的稳定性与保存时间的长短呈反比，细胞膜的稳定性也在下降，在这种情况下，应尽快开展血清血浆的分离 。

（2）不同的抗凝剂有其不同的分子构型，会对血液中各细胞的细胞膜产生不同的作用，有的会增加细胞膜的稳定性，有的会降低细胞膜的稳定性，所以选择一款合适的抗凝剂至关重要（抗凝剂推荐：EDTA、柠檬酸钠） 。

（3）血液存放过程中温度过高或反复冻融对细胞膜有很大的损害。温度过高及反复冻融会使细胞膜上的结构蛋白构象发生改变，进而造成细胞膜的弹性降低以致破解产生溶血现象，所以用于分离血清血浆的血液应避免反复冻融。