描述：
无表面活性剂动物细胞/组织总蛋白提取试剂盒，由优化细胞裂解液和离心管柱及 2.0ml 接收管组成， 能够快速从动物细胞（昆虫/哺乳动物/其他培养细胞）和组织（无脊椎动物和脊椎动物）中提取总蛋白。蛋白提取缓冲液中不含任何表面活性剂和 EDTA。试剂盒使用离心管柱**技术，样品量最小可处理 20ul，最大可达 500ul，解决了用户起始原料限制的因素。操作时间小于 5 分钟，产率可到 1-5 mg/ml。
缓冲液配方：非公开
应用：
可应用于蛋白质组学研究(LC/MS), IP, ELISA，2D 分析，等电聚焦，SDS-PAGE，immunoblottings 及其他应用。试剂盒提供了一个非常快速制备高浓度总蛋白的方法。由于蛋白产量高，且低盐浓度，提取出的蛋白无需脱盐和浓缩，即可直接用于下游应用。缓冲液配方：非公开
试剂盒组分
- 15ml 缓冲液A
- 15ml 缓 冲 液 B
- 50 个离心管柱
- 50 个收集管
- 4 根塑料研磨棒
储存：
储存于 4℃重要产品信息
无表面活性剂动物细胞/组织总蛋白提取试剂盒可以快速提取总蛋白，因此蛋白酶抑制剂不是必须加入，但是如果下游实验需要较长时间或者蛋白提取后保存较长时间，建议在Buffer A 中添加蛋白酶抑制剂。推荐使用BCA（Pierce）试剂盒用于蛋白浓度测定。研究蛋白磷酸化，磷酸酶抑制剂应在使用前加入 Buffer A 中。
所需附加材料
1XPBS
涡旋震荡仪台式离心机
BCA 蛋白定量试剂盒（Pierce, Cat # :23227）
操作方法：
细胞样品总蛋白提取- 非贴壁细胞
- 蛋白提取前，将Buffer 和离心管柱及接收管套管放在冰上预冷。
- 低速离心收集细胞，在离心管中加入 1ml 预冷的 PBS,3000rpm 离心 2-3 分钟清洗细胞。吸去上清，剩余与细胞体积相同体积的PBS。涡旋震荡重悬细胞。
- 加入表格 1 中相应体积的 Buffer A，涡旋震荡 10-20 秒裂解细胞。加入同等体积的 Buffer B 到管中震荡混匀。
请注意：部分未完全裂解的细胞不会影响样品质量。
- 将裂解的细胞转移到预冷的离心管柱套管中，14000-16000rpm 离心 30 秒-1 分钟取出。弃去离心管柱，将接收管中溶液转移到新的离心管中保存。蛋白提取完成可应用于下游实验。
表格 1，不同细胞体积应加入相应体积裂解液
| 细胞体积（ul） | 缓冲液 A（ul） | 缓冲液 B（ul） |
| 5 | 20 | 20 |
| 10 | 50 | 50 |
| 20 | 100 | 100 |
| 30 | 200 | 200 |
- 贴壁细胞
- 将缓冲液和离心管柱及接收管套管放在冰上预冷
- 贴壁细胞生长 90-100%融合，将预冷的 PBS 直接加入培养板，培养皿或培养瓶中清洗贴壁细胞，吸去上清。
- 按照表 2 中将相应体积的 Buffer A 均匀的加入整个器皿表面，将器皿放在冰上 2 分钟，加入等体积的 Buffer B。用吸头将细胞刮下混匀后，将裂解的细胞转移到预冷的离心管柱套管中，14000-16000rpm 离心 30 秒-1 分钟取出。弃去离心管柱，蛋白提取完成可应用于下游实验。
表格 2，不同贴壁细胞量应加入相应体积裂解液
| 器皿 | Buffer A（ul） | Buffer B（ul） |
| 96 孔板 | 25 | 25 |
| 24 孔板 | 125 | 125 |
| 6 孔板 | 250 | 250 |
动物组织总蛋白提取
以下步骤是从 10-20mg 动物组织中提取，对于昆虫样品，例如果蝇，使用 15-20 个幼虫，蛹或成虫样本。如果起始量较大或者较小，需调整相应裂解液的用量比例。
- 将Buffer 和离心管柱及接收管套管放在冰上预冷
- 将 10-20mg 新鲜/冷冻组织放置于离心管柱上，加入 200ul Buffer A 到离心管柱上，用塑料棍扭转研磨 50-60 次，加入 200ul Buffer B 到离心管柱中，继续研磨 30-60 次。注意：塑料研磨棒可以重复使用，用蒸馏水彻底冲洗干净，用纸巾擦干。
- 盖上盖子，14000-16000rpm 离心 30 秒-1 分钟取出。弃去离心管柱，将接收管中的蛋白溶液转移到新管中保存，蛋白提取完成可应用于下游实验。