RNA实验常规样本的采集

样本采集前注意事项

1、取样的代表性

为保证客户所得到实验最终结果具有科学意义，所采集的样本应该通过严格的细胞学、组织学、病理学等相关鉴定。

2、取样的准确性

组织取材部位要准确，正确识别所要研究的组织部位，剔除与研究无关的组织部位，在条件允许的前体下，争取做到实验组与对照组的样本在取材时间、部位、处理条件等方面尽可能保持一致。

3、取样的及时性

用于研究的实验样本，在采集、贮存、运输和制备的过程中尽可能地做到迅速，最大限度的缩短从样本采集到实验的时间。

4、取样的低温性

所取样本离体后，经快速清洗等处理后，立即投入液氮中速冻至少1小时，再转入-80℃冰箱中，避免反复冻融，或直接用干冰运输

5、取样的无污染性

所用实验器械、容器需经去RNA酶处理 ，处理样本的试剂需用RNase-free水配制。

采集样本类型介绍

1. 动物组织/临床组织采集；

2. 植物组织组织采集；

3. 细胞样品的采集；

4. PAXgene Blood RNA Tube 采血；

5. 血清血浆采集；

6. 尿液、胆汁、腹腔引流液等体液的采集；

7. 石蜡样本采集；

8. 细菌样本采集；

9. 真菌样本采集；

10. Total RNA样品；

具体采样方法下期会详述。

样本运输方式

1、干冰运输：全能性，适用于所有类型的样本，注意干冰类型的选择，以及干冰的用量，运输过程中不得少于10kg,使用厚壁泡沫盒，防止样本在到达实验室之前干冰挥发完。

2、冰袋运输：有选择性，仅适合短途运输，并且冰袋量要充足。

3、液氮运输：危险系数较高，不建议客户使用，如若使用仅限同城客户。

样本运输注意事项

1.保证干冰充足：组织运输时，样本要深埋在干冰中，干冰至少在5~10Kg（夏天干冰要放足量）。切记：样本不能散在干冰中运输（样本较少时，亦可考虑使用保温杯寄送）

2.RNAlater保存的样本运输：RNAlater保存样本时，要确保组织样本完全浸没在RNAlater中。

3. 液氮运输：（不建议使用）使用螺纹冻存管来存放样本组织，切忌旋紧盖子，避免振动和摇晃，以免氮气膨胀而爆炸。

4.包装完好。

5.随箱一同寄送提交单。

6.选择安全可靠、效率高的快递公司并自行跟踪快递。

RNAlater的使用方法

1.用解剖刀将组织切为长宽高均≤ 0.5cm 的样本，也可以保存较小体积的整个组织器官（如小鼠脾脏及肾脏等）；为达到理想的保存效果，必须将组织切割成规定的尺寸，组织块过大会影响RNAlater渗入到组织内部的速率，并且会导致RNAlater无法完全覆盖组织，未被RNAlater覆盖到的组织部位则会被RNase所降解。

2.将组织样本完全浸入RNAlater中，以使组织完全浸没；采样的容器应该足够大，避免组织块挤在一起，为避免组织块在运输的过程中露出液面，应将RNAlater灌满容器。

3.将样本置于 4°C保存过夜（以使RNAlater完全渗透组织） ，然后转移至-80°C长期保存。

4.运输方式：干冰或生物冰袋运输。

5.如果需要抽提RNA，只要将组织块取出并将RNAlater吸干，然后直接研磨、或者匀浆化，就像新鲜组织一样。

RNAlater使用注意事项 ：

（1）室温保存，如产生沉淀，可37℃加热溶解沉淀，沉淀溶解后可继续使用。

（2）仅适用于新鲜组织样本，不适用已冷冻保存的组织样本 ，骨头及表皮蜡质丰富的植物同样也不适用。

（3）可保存绝大多数组织样本，不建议用RNAlater保存液体样本（RNAlater会与液体样本发生互溶）。

（4） RNAlater保存样本时，不要立即冷冻，需4℃保存过夜后，再转到-20℃或-80℃(梯度降温)，使得RNAlater充分浸润样本。

（5）采集样本时，在没有冰箱的情况下，可以先把保存于RNAlater的样品暂时置于冰上。

（6） RNAlater保存样本，不影响组织结构，实验切取所需量，其余可放回原保存液中。

（7）一般生物样本保存于RNAlater中，-80°C可长期保存。

好了，本期RNA提取专题小课堂就到这里了。
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