原代培养是直接从生物体获取组织或器官的一部分进行培养，也称初代培养。严格地说，即从体内取出组织接种培养到第一次传代阶段；但实际上，通常把第一代至第十代以内的培养细胞统称为原代细胞培养。一般持续1-4周，此期细胞活跃，可见细胞分裂，但不旺盛。原代培养细胞与体内原组织在形态结构和功能活动上相似性大，由于培养的细胞刚刚从活体组织分离出来，故更接近于生物体内的生活状态。这一方法可为研究生物体细胞的生长、代谢、繁殖提供有力的手段，同时也为以后传代培养创造条件。
一 液体组织材料的分离方法
原代培养的过程指动物的组织或器官从机体取出后，经机械法或各种酶类（常用胰蛋白酶、胶原酶）和鳌合剂（常用EDTA）处理，使之分散成单个细胞，加入适量培养基，置于合适的培养容器中，在无菌、适当温度和一定条件下，使之生存、生长和繁殖的过程。
对于悬浮生长的细胞，如白血病细胞、淋巴细胞、骨髓细胞、胸水和腹水中的癌细胞和免疫细胞无需消化，可采用低速离心分离，直接培养，或经淋巴细胞分离液分离后接种培养。
1.将血液、羊水、胸水或腹水等悬液直接转至离心管中，1000rpm离心5min；
2.弃上清，沉淀用无钙、镁的PBS重悬后，1000rpm离心5min；
3.重复上述离心操作2-3次；
4.用培养基重悬，调整适当细胞浓度后分瓶培养；
5.如选用悬液中某种细胞，可采用离心后的细胞分层液收获目的细胞。
特点：简便、快速，但对组织机械损伤大，而且细胞分散效果差，适用于处理纤维成分少的软组织。
实体组织材料的分离方法
组织消化法是把组织剪切成较小团块（或糊状），应用酶的生化作用和非酶的化学作用进一步使细胞间的桥连结构松动，使团块膨松，由块状变成絮状，此时再采用机械法，用移液器反复吹打分散或电磁搅拌或在摇珠瓶中振荡，使细胞团块得以较充分的分散，制成少量细胞群团和大量单个细胞的细胞悬液，接种培养后，细胞容易贴壁生长
胰蛋白酶消化法
原理：胰蛋白酶是一种胰脏制品，对蛋白质有水解作用，主要作用于赖氨酸或精氨酸相连接的肽键，使细胞间质中的蛋白质水解而使细胞分散开。
影响胰蛋白酶作用的主要因素：细胞类型、酶的活力、酶的浓度、温度、pH、无机盐离子、消化时间等。
Ⅱ、非酶消化法（EDTA消化法）
EDTA是一种非酶消化物，又称螯合剂或Versene，全名为乙烯二胺四乙酸。常用不含钙、镁离子的PBS配成0.02%的工作液，对一些组织，尤其是上皮组织分散效果好，该化学物质能与细胞上的钙、镁离子结合形成螯合物，利用结合后的机械力使细胞变圆而分散细胞或使贴壁细胞从瓶壁上脱离。
Ⅲ、消化分离法的注意事项
(1)组织块必须漂洗2-3次以除去组织中的钙、镁离子及血清，尽最大限度减少对胰蛋白酶和EDTA的抑制作用；
(2)胰蛋白酶浓度不宜过高，作用时间不能太长，以避免毒性作用；
(3)消化后组织不仅要尽量弃去消化液，以避免毒性产生，而且动作要轻，以避免膨松的细胞随漂洗而丢失。